抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化

人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L基因,构建p UM19-T-Bcl-x L质粒,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;其次设计包含PTD序列的Bcl-x L引物,以测序正确的p UM19-T-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增PTD-Bcl-x L序列,将扩增序列克隆入p ET28a载体,构建PTD-Bcl-x L蛋白的原核表达质粒p ET28a-PTD-Bcl-x L,并对p ET28a-PTD-Bcl-x L载体双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET28a-PTD-Bcl-x L重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度和诱导时间进行了优化;SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况,在变性条件下用Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白;最后用SDS-PAGE、Western Blot及质谱对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p UM19-T-Bcl-x L质粒出现约774 bp大小条带,p UM19-T-Bcl-x L质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建p UM19-T-Bcl-x L质粒;双酶切p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒出现约744 bp大小条带,p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p ET28a-PTD-Bcl-x L原核表达载体;在IPTG诱导下p ET28a-Bcl-x L重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出36 k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为6 h;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液超声后的沉淀里,以包涵体形式表达,经Ni-NTA琼脂纯化获得了高纯度的融合蛋白;Western Blot和质谱鉴定证明IPTG诱导表达蛋白和纯化的融合蛋白为PTD-Bcl-x L蛋白。纯化得到了PTD-Bc L-x L融合蛋白,推进了PTD-Bcl-x L蛋白在猪、牛等家畜精液冷冻保存的应用进程。     

奶水牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

奶牛乳腺炎是乳腺组织受到物理、化学、微生物等刺激所发生的一种炎症变化，是一种多因素疾病。其中微生物因素是引发奶牛乳腺炎的主要因素，多种非特定的病原微生物均能引起奶牛乳腺炎，如细菌、霉形体、真菌、病毒等。较常见的致病菌约为150多种，以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌为主，约占整个奶牛乳腺炎病例的90％以上。     

添加亚油酸条件下不同剂量硝酸钠对水牛瘤胃体外发酵脂肪酸组成及相关微生物数量的影响

为了探究添加亚油酸条件下不同剂量硝酸钠对水牛瘤胃体外发酵脂肪酸组成及相关微生物数量的影响,本试验选用3头装有永久性瘤胃瘘管的母水牛,以精粗比40∶60为底物进行瘤胃液体外发酵试验。试验组硝酸钠的浓度分别为1、2、3 mg·mL^-1,对照组不加硝酸钠,每组均添加0.25 mg·mL^-1的亚油酸,每组各5个重复。在体外培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量,24 h结束培养,测定瘤胃体外发酵参数、脂肪酸含量及瘤胃微生物数量。结果表明：1）添加硝酸钠显著降低了总产气量和甲烷产量（P<0.05）;2）添加硝酸钠pH值和氨态氮（NH₃-N）含量显著升高（P<0.05）,异丁酸和异戊酸含量显著降低（P<0.05）,而对总挥发性脂肪酸（TVFA）含量无显著性影响（P>0.05）;3）添加1 mg·mL^-1硝酸钠,C18：2cis-9,trans-11、C18：2trans-10,cis-12含量和不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸（UFA/SFA）显著高于其他组（P<0.05）,且C20：5n3 （EPA）含量显著高于添加3 mg·mL^-1硝酸钠组（P<0.05）,添加2 mg·mL^-1硝酸钠C22：6n3 （DHA）含量显著高于其他组（P<0.05）;4）添加硝酸钠组原虫数量显著低于对照组（P<0.05）,添加2、3 mg·mL^-1硝酸钠产甲烷菌数量显著低于添加1 mg·mL^-1硝酸钠组（P<0.05）,添加1 mg·mL^-1硝酸钠总细菌、真菌、溶纤维丁酸弧菌、蛋白分解丁酸弧菌、非典型丁酸弧菌、亨氏丁酸弧菌数量显著高于其他组（P<0.05）。由此可得,体外法添加1~3 mg·mL^-1硝酸钠和0.25 mg·mL^-1亚油酸在维持水牛TVFA含量不变的情况下显著降低了甲烷含量,且1 mg·mL^-1硝酸钠能促进亚油酸生成共轭亚油酸（CLA）,优化脂肪酸组成,并能增加大多数瘤胃微生物的数量。     

水牛犊牛血浆外泌体的分离与鉴定

研究旨在从水牛犊牛血浆中分离外泌体,并对分离的外泌体进行分子生物学特征分析和鉴定。采用差速离心法分离3头水牛犊牛的血浆外泌体,并在透射电子显微镜下观察其形态,使用纳米粒度及Zeta电位仪对提取的外泌体进行粒径大小分析,应用Western blotting方法检测外泌体标记蛋白钙联蛋白（Calnexin）、肿瘤易感基因101（TSG101）、CD9、CD81在3头水牛犊牛血浆外泌体中的表达情况。结果显示,从水牛犊牛血浆中分离的外泌体形态多为圆形和椭圆形,直径在30~150 nm;Western blotting检测结果表明,在水牛血浆外泌体表面,特异性蛋白Calnexin、TSG101和CD81阳性表达,CD9不表达。本研究从形态学和分子生物学特征等方面证实研究获得的提取物为外泌体,由此说明,差速离心法可以成功分离提取水牛犊牛血浆中的外泌体,为水牛外泌体的后续研究提供了重要技术基础和参考。     

实用型荔枝虫害诊断专家系统设计方法研究 实用型荔枝虫害诊断专家系统设计方法研究

针对大型检索表为表示的专家知识体系，研究提出了一套可重用的、实用性强的系统设计方法，建立了荔枝虫害诊断专家系统（LDS）。经生产示范应用表明：实现了人机操作界面直观、明了，降低了客户端的专业要求，提高了系统的实用性。还对系统所构造的人机界面、知识存储结构设计和控制策略给出实践示例。     

环形生活污水净化沼气池处理猪场废水效果好

规模化养猪场废水由于有机物浓度高,水量大且集中,这些废弃物的集中排放会严重污染大气,水域和地下水,给农业生态环境带来严重的破坏。为尽快开创出一条符合中国国情的低投入、低运行成本的规模化养猪场污水处理的新路子,笔者进行了一系列的探索,于2000年发明了环形生活污水高效净化沼气装置,该装置在处理极高浓度的生活污水时,在没有任何动力的情况下,CODCr,BOD5的去除效率达到90%以上,出水水质可达到GB8978-1996二级排放标准。为此,笔者将这一环形生活污水高效净化沼气装置的应用范围延伸到处理极高浓度的养猪场废水。1　环形生活…     

小型农用汽油机燃用沼气的技术措施

本文介绍了沼气的特性,对改装后的沼气发动机进行参数调整的性能进行了分析,探讨了沼气在农用小型汽油机上应用可行的技术措施。     

用免疫抑制素提高水牛超排效果的初步研究

为了探讨免疫抑制素对水牛超排的作用,进一步揭示水牛超排机理,选取17头具有正常发情周期的母水牛,随机分为试验组(10头),对照组(7头),试验组首次免疫重组猪抑制素亚基融合蛋白1 mg/头,首免后第28和第56天分别进行加强免疫,剂量为0.5 mg/头,对照组牛同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂。试验组牛在首免、二免和三免当天分别用B超仪进行卵泡大小监测和计数,在超排后第6天用B超仪进行卵泡和黄体数进行统计。用免疫抑制素组水牛平均卵泡数在加强免疫后,卵泡数量从8.8增加到15.0个,但与对照组相比差异不显著(P>0.05)。超排后,试验组的平均成熟卵泡数、黄体数和排卵率分别是12.2±0.79,9.0±1.06和73.77%,与对照组相比差异显著。胚胎回收总数和可用胚胎数差异不显著。结果表明,利用免疫抑制素免疫水牛,可提高水牛的超排效果。     

山羊扩展莫尼茨绦虫病的防治

山羊扩展莫尼茨绦虫病是由裸头科、莫尼茨属的扩展莫尼茨绦虫（Moniezia expansa）寄生于山羊小肠而引起的一种消化道寄生虫病。特别对羔羊危害严重，羔羊不但易感，感染后常会引起腹泻、贫血、消瘦、阻碍生长发育，严重可致死亡，造成很大的经济损失。现对一起山羊扩展莫尼茨绦虫病的防治报告如下。     

不同饲养管理条件下黄牛的同期发情试验

[目的]为了便于集中配种或胚胎移植。[方法]采取了三种方法：一次PG改进法、CI-DR＋PMSG＋PG＋LHRH-A3法、PMSG＋PG＋LHRH-A3法处理三种不同饲养管理条件下的黄牛,诱导同期发情。[结果]表明四次处理的同期发情率分别为100%、100%、98.8%、82.4%,人工授精或胚胎移植受胎率分别为27.3%、80%、76.5%、59.2%。[结论]从经济角度表明一次PG改进法、PMSG＋PG＋LHRH-A3法是比较切合实际,也比较理想的同期发情方法,效果也比较理想。